稳定表达狂犬病病毒CTN-1V株糖蛋白细胞系的建立

• 作者: 俞永新 刘景华 唐建蓉 曹守春 李加 李玉华 王云鹏 石磊泰 董关木
• 来源期刊: 中华实验和临床病毒学杂志
• 关键词: 狂犬病病毒 糖蛋白类 细胞系
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 483-485
• 页数: 3页
• 字数: 2960字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2013.06.029

摘要

目的 构建能稳定表达狂犬病病毒糖蛋白的CHO细胞系.方法 用RT-PCR法扩增和分离CTN-1V株狂犬病毒糖蛋白基因,测序后克隆入pCDNA5.0FRT载体,构建重组质粒pCDNA5.0FRT-G,之后与POG44质粒共转染CHO细胞,采用潮霉素B抗性筛选,挑选阳性克隆,间接免疫荧光和Western Blot进行稳定表达细胞系的鉴定.结果 经酶切和测序鉴定,获得重组表达质粒pCDNA5.0FRT-G,共转染CHO细胞后,获得肉眼可见阳性细胞克隆,刮取阳性克隆进行传代扩大培养并定义为第2代,经过10代后免疫荧光和Western Blot结果依然阳性.结论 成功建立稳定表达狂犬病病毒糖蛋白的CHO细胞系,为深入研究糖蛋白的功能奠定基础.