用大肠杆菌制备O157多糖-菌毛蛋白结合物的研究

• 作者: 刘波 吴军 孙鹏 张部昌 徐敏锐
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 奈瑟球菌,脑膜炎 O-糖基化修饰系统 PilE PglL 大肠杆菌 O157型多糖基因簇 多糖-蛋白结合疫苗
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 598-603
• 页数: 6页
• 分类号: R378.1
• 字数: 4529字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2013.08.009

摘要

目的 以大肠杆菌O157型多糖与菌毛蛋白PilE为模型,在大肠杆菌中重构脑膜炎奈瑟球菌的O-糖基化修饰系统,为建立一步生物交联法制备多糖-蛋白结合疫苗技术提供基础.方法 用Red重组技术敲除大肠杆菌W3110的O抗原连接酶基因waaL,构建CLM24菌株.在该菌株中共表达脑膜炎奈瑟球菌菌毛蛋白基因pilE、寡糖转移酶基因pglL,构建O-糖基化修饰系统.分别转化大肠杆菌鼠李糖转移酶基因wbbL与大肠杆菌O157型多糖表达载体于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,再利用Western印迹检测菌毛蛋白PilE的修饰情况.结果 利用抗His-tag单抗进行Western印迹检测,16℃ IPTG诱导条件下,转化大肠杆菌鼠李糖转移酶基因wbbL于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,重组菌CLM24/pMMB66 EH-pilE-his/ pETtac28-wbb L-pglL与其他对照菌相比,不仅在相对分子质量为19×103处有特异性条带,而且在相对分子质量(40 ～60)×103处也出现了特异的梯状条带；转化大肠杆菌O157的O多糖基因簇克隆载体于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,重组菌CLM24/pMMB66EH-pilE-his/ pETtac28-pglL/ pACY C184-O157用抗O157多抗和抗His-tag单抗进行Western印迹检测,在相对分子质量(40 ～60)×103处均产生特异的梯状条带.结论 在大肠杆菌中重建的O-糖基化修饰系统可以利用自身的O16型O多糖或异源的O157型O多糖修饰菌毛蛋白PilE,获得多糖-蛋白结合物.本研究为建立一步生物交联法制备多糖-蛋白结合疫苗提供了技术基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘波	军事医学科学院生物工程研究所	32	100	6.0	9.0
2	吴军	军事医学科学院生物工程研究所	55	227	8.0	13.0
3	张部昌	安徽大学生命科学学院	82	550	12.0	20.0
4	孙鹏	军事医学科学院生物工程研究所	5	5	2.0	2.0
5	徐敏锐	安徽大学生命科学学院	2	2	1.0	1.0