抗Bt(Cry1B)毒素单链抗体在sf9昆虫细胞中的表达及活性测定

• 作者: 刘媛 刘贤金 张存政 张霄 徐重新 谢雅晶 黄鹰
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Cry1B毒素 单链抗体 真核表达系统 酶联免疫分析
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 985-991
• 页数: 7页
• 分类号: Q786
• 字数: 4650字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2013.05.010

摘要

通过构建pFastBacTM HT-A-scFv重组质粒,并将重组质粒化转DH10BacTM Escherichia coli感受态细胞,进行蓝白斑筛选,获得阳性克隆.PCR和基因测序检测证实挑取的白斑阳性单克隆存在完整、正确的单链抗体基因.提取阳性克隆中的重组杆状病毒穿梭载体(Bacmid-scFv)侵染sf9昆虫细胞,细胞发生明显病变特征.通过SDS-PAGE、Western blotting和间接竞争性ELISA等方法检测,发现单链抗体在sf9昆虫细胞中表达成功,测得纯化后蛋白浓度为103.000 0 μg/ml,Cry1B毒素对单链抗体的抑制中浓度(IC50)为1.010 0 μg/ml,最低检测线IC10为0.011 3μg/ml,线性检测范围为0.500 0～10.000 0 μg/ml.可溶性scFv对抗原类似物无交叉反应.