超正电荷绿荧光蛋白+36GFP作为核酸载体的细胞穿透性分析

• 作者: 于海涛 俞盈 房有荣 李红玉 阎辉
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: +36GFP蛋白 细胞穿透 细胞转染
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 生物技术与方法
• 页码范围: 520-531
• 语种: 中文

摘要

旨在通过原核表达纯化超正电荷绿色荧光蛋白+36GFP,研究其与核酸的结合作用及作为核酸载体的细胞转导功能.将pET+36GFP-HA2质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,然后表达纯化+36GFP蛋白.将得到的目的蛋白在特定浓度下分别转导293细胞、HepG2细胞、A549细胞和B16细胞,流式细胞仪检测+36GFP的转导效率；+36GFP蛋白(100 nmol/L)转导A549细胞,激光共聚焦显微镜观察结果；将+36GFP蛋白与质粒DNA按不同比例孵育,凝胶阻滞实验检测+36GFP与DNA的结合能力；激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测+36GFP蛋白携带质粒DNA转导细胞后报告基因的表达.结果显示,+36GFP蛋白具有较高的细胞转导效率,且随浓度升高转导效率增加,呈浓度依赖性.凝胶阻滞实验显示,+36GFP能够与质粒DNA结合,阻滞DNA在凝胶中迁移,且呈现一定的浓度依赖性.+36GFP包裹质粒转导细胞后,可高效携带质粒DNA转导进入细胞,使质粒报告基因得到表达.本研究成功表达纯化了+36GFP蛋白,证实该蛋白具有较高的细胞转导效率,可将外源核酸携带入细胞使外源基因得到表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	房有荣	浙江省医学科学院药物研究所	4	2	1.0	1.0
2	阎辉	浙江省医学科学院药物研究所	12	10	2.0	3.0
3	俞盈	浙江省医学科学院药物研究所	3	9	2.0	3.0
4	李红玉	浙江省医学科学院药物研究所	4	8	2.0	2.0
5	于海涛	浙江省医学科学院药物研究所	3	9	2.0	3.0