登革病毒非结构蛋白NS4A的克隆表达及与其相互作用蛋白质的亲和纯化

• 作者: 刘超 夏君 张佩芬 张萍 李玉叶 谢炯 黄曦
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 登革病毒 NS4A 串联亲和纯化 相互作用
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 病毒学
• 页码范围: 184-187
• 页数: 4页
• 字数: 3642字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2013.03.005

摘要

目的 克隆表达登革病毒非结构蛋白NS4A,分离纯化与其相互作用的细胞蛋白.方法 用特异性引物PCR扩增出FLAG-NS4A-HA基因片段,克隆至真核表达载体pSG5中,将重组质粒通过脂质体法瞬时转染入A549细胞,并通过Western blot检测NS4A融合蛋白的表达情况.利用串联亲和纯化系统(TAP)纯化分离与NS4A相互作用的蛋白,Western blot技术及银染SDS-PAGE验证NS4A蛋白复合物的纯化和分离情况.结果 成功构建NS4A蛋白融合表达载体和FLAG、HA串联亲和纯化系统,SDS-PAGE和银染结果显示TAP系统分离得到了NS4A蛋白带和2条可能与NS4A相互作用的蛋白质片段.结论 成功分离纯化与NS4A相互作用的细胞蛋白,为进一步研究机体抗登革病毒感染的机制奠定了基础.