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siRNA真核表达载体对大鼠耳蜗前体细胞Notch3基因表达的影响
siRNA真核表达载体对大鼠耳蜗前体细胞Notch3基因表达的影响
作者:
王军利
许映龙
许珉
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
Notch3
小分子干扰
耳蜗
前体细胞
摘要:
目的 构建Notch3基因的siRNA真核表达载体,探讨其对大鼠耳蜗前体细胞中Notch3基因表达的影响.方法 机械分离并胰酶消化新生大鼠耳蜗感觉上皮,悬浮培养基培养耳蜗前体细胞.根据Notch3基因序列设计并合成2对siRNA,插入pSilencer4.1-CMV neo载体,进行酶切及测序鉴定.采用脂质体法向大鼠耳蜗前体细胞转染重组质粒,采用Real time-PCR和Western blotting法检测重组质粒对Notch3基因的干扰效果.结果 经前体细胞标记物Abcg2染色鉴定证实原代培养的细胞球为耳蜗前体细胞.酶切及测序鉴定证实成功构建了siRNA真核表达载体pSilencer-Notch3-S1和pSilencer-Notch3-S2. Real-time PCR和Western blotting检测结果显示所构建的Notch3基因真核表达载体成功地干扰了目的基因的表达.与空白对照组比较,转染pSilencer-Notch3-S1和pSilencer-Notch3-S2的细胞Notch 3 mRNA和蛋白表达量均有明显减少,而转染空质粒的细胞与空白对照组比较无显著差异.结论 成功构建了大鼠Notch3基因的RNAi真核表达载体,该载体在大鼠耳蜗前体细胞中对Notch3基因的表达可发挥抑制作用.
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文献信息
篇名
siRNA真核表达载体对大鼠耳蜗前体细胞Notch3基因表达的影响
来源期刊
解放军医学杂志
学科
医学
关键词
Notch3
小分子干扰
耳蜗
前体细胞
年,卷(期)
2013,(5)
所属期刊栏目
基础研究
研究方向
页码范围
369-372
页数
分类号
R329.492
字数
语种
中文
DOI
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单位
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被引次数
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1
王军利
西安西安交通大学第二附属医院耳鼻喉科
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许映龙
西安西安交通大学第二附属医院耳鼻喉科
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许珉
西安西安交通大学第二附属医院耳鼻喉科
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Notch3
小分子干扰
耳蜗
前体细胞
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
解放军医学杂志
主办单位:
人民军医出版社
出版周期:
月刊
ISSN:
0577-7402
CN:
11-1056/R
开本:
大16开
出版地:
北京100036信箱188分箱
邮发代号:
2-74
创刊时间:
1964
语种:
chi
出版文献量(篇)
8116
总下载数(次)
11
总被引数(次)
57068
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:
the National Natural Science Foundation of China
官方网址:
http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:
青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:
数理科学
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