口蹄疫病毒一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 周哲学 张毅 文心田 曹三杰 李兴玉 李金海 陈斌
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 口蹄疫病毒 TaqMan- MGB 荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 380-384,407
• 页数: 6页
• 分类号: R373
• 字数: 4138字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2013.04.013

摘要

目的 建立一种能快速、高效、敏感、特异地检测口蹄疫病毒(FMDV)的一步法荧光定量RT-PCR检测方法.方法 根据FMDV聚合酶3D基因序列比对结果,设计特异性引物和MGB探针;通过优化,得到最佳反应体系和反应条件;分别以质粒和病毒RNA为模板,构建标准曲线;并进行特异性、敏感性、重复性试验.结果 该方法能特异性检测A型、O型、Asia 1型FMDV,而对猪瘟、猪蓝耳病、猪圆环病毒、猪细小病毒、猪狂犬病毒、猪乙型脑炎等病原检测结果均为阴性;构建的荧光定量标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系,检测质粒的敏感性可达83.4copies/μL,检测病毒RNA的敏感性可达7.1 fg/μL,比多重RT-PCR敏感性高10倍;对4份样品进行5次批内和批间重复检测,检测结果变异系数均小于2%.结论 建立的口蹄疫病毒一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于口蹄疫临床样品诊断、流行病学调查和畜产品安全监测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	文心田	四川农业大学动物医学院猪病研究中心	100	612	14.0	19.0
2	曹三杰	四川农业大学动物医学院猪病研究中心	89	524	12.0	17.0
3	陈斌		43	203	8.0	13.0
4	李兴玉		29	98	5.0	8.0
5	李金海	四川农业大学动物医学院猪病研究中心	20	110	7.0	9.0
7	张毅		30	56	5.0	5.0
8	周哲学		6	14	3.0	3.0