人溶血磷脂酸受体1基因的克隆、表达载体构建及瞬时转染293T细胞

• 作者: 李铁威 赵鹏飞 阿拉坦高勒 马洁
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: LPAR1 基因克隆 转基因细胞模型 cAMP应答
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 170-175
• 语种: 中文

摘要

从人胃癌细胞中提取RNA然后反转录成cDNA,进而PCR克隆LPAR1(Lysophosphatidic Acid Receptor1)基因,亚克隆到pCR2.1载体,通过测序、酶切、连接到表达载体pIRES2-EGFP,通过酶切、测序鉴定获得pIRES2-EGFP-LPAR1重组质粒;表达载体以Lipofectamine2000介导转染293T细胞.用Real-timePCR法检测外源基因在293T细胞中表达,并通过ELISA检测LPAR1的活性.结果表明,克隆到LPAR1基因并获得了pIRES2-EGFP-LPAR1表达载体,在293T细胞中确认到LPAR1基因的过量表达,并通过LPAR1/Gi信号通路抑制cAMP形成加以验证所克隆LPAR1活性.LPAR1过表达细胞模型的建立,不仅为下一步对该受体功能研究奠定了基础,还使利用LPA剂量依赖性的抑制cAMP的线性关系定量LPA的细胞学方法成为可能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	阿拉坦高勒	内蒙古大学生命科学学院	30	91	5.0	8.0
2	赵鹏飞	内蒙古大学生命科学学院	8	13	2.0	3.0
3	李铁威	内蒙古大学生命科学学院	5	10	1.0	3.0
4	马洁	内蒙古大学生命科学学院	6	10	1.0	3.0