棉花 GhMDH 基因的克隆及其蛋白诱导和酶活性分析

• 作者: 司怀军 吴家和 张宁 李青
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 棉花 苹果酸脱氢酶 基因克隆 诱导表达 包涵体
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 页码范围: 13-18
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4563字
• 语种: 中文

摘要

分析棉花盐胁迫相关的EST文库，设计特异性引物，利用RACE技术从棉花中克隆出苹果酸脱氢酶（ Malate dehydrogenase ，MDH）基因，命名为GhMDH。基因全长1130 bp，最大开放阅读框1014 bp，编码338个氨基酸，分子量为35．495 kDa，等电点pI＝8．94。将该基因编码区插入到原核表达载体pET23b中，获得pET23b-GhMDH重组载体。利用IPTG诱导表达目标蛋白，发现通常条件下获得的重组蛋白以包涵体的形式存在。对诱导时间、IPTG浓度和温度等条件进行优化，结果表明，除了在28℃低温以下诱导的蛋白有少量为可溶，其他条件诱导的蛋白均以包涵体形式存在。为了得到足够的重组蛋白，对GhMDH包涵体蛋白采用脲素缓冲液溶解，对提取液进行镍亲和层析柱纯化，对洗脱的产物经脲素梯度透析复性。利用生化测定法测定目标蛋白的酶活性，结果表明，克隆的GhMDH基因编码蛋白酶具有脱氢酶活性。以上结果为GhMDH在棉花体内氧化还原动态以及参与抗逆功能等研究提供前提条件。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李青	甘肃农业大学甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室	7	9	2.0	2.0
5	吴家和	中国科学院微生物研究所植物基因组学国家重点实验室	29	207	8.0	12.0
6	司怀军	甘肃农业大学甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室	69	658	14.0	23.0
7	张宁	甘肃农业大学甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室	53	332	9.0	17.0