山羊痘和小反刍兽疫病毒双重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 杨仕标 赵文华 高华峰
• 来源期刊: 动物医学进展
• 关键词: 山羊痘病毒 小反刍兽疫病毒 实时荧光定量RT-PCR 探针
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 9-14
• 页数: 6页
• 字数: 4286字
• 语种: 中文

摘要

为实现对山羊痘病毒(GTPV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)的同步快速检测,基于GTPV的ITR基因及PPRV的M基因,分别设计合成两套特异性引物及探针；探针分别用5'-FAM-TAMRA-3’及5'-JOE-Eclipse-3'标记物进行标记以实现同步检测.结果显示,所建立的ITR-M二联探针荧光定量RT-PCR方法可同时特异性检测GTPV和PPRV产生特异性荧光信号,而对禽痘病毒、犬瘟热病毒等相关病毒无荧光信号可检出.以GTPV-ITR和PPRV-M的pMD-18T载体质粒为标准品,构建了双重标准曲线,ITR M探针的检测敏感度可分别达103拷贝/μL及101.2拷贝/μL cDNA.本研究初步建立了可同步快速检测GT-PV和PPRV的二联实时荧光定量RT-PCR法.