秦川牛FABP4基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 付常振 姜碧杰 季舒涵 成功 昝林森 王洪宝 王虹 魏胜娟
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 秦川牛 FABP4基因 pAdTrack-CMV pAdEasy-1 腺病毒
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 畜牧·资源昆虫
• 页码范围: 1434-1440
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.07.014

摘要

[目的]旨在通过构建秦川牛FABP4基因的重组腺病毒载体,为在细胞水平研究FABP4基因的功能和作用机制做准备.[方法]根据GenBank收录的牛FABP4基因mRNA序列设计引物,PCR扩增并克隆测序.将目的基因连接到穿梭载体pAdTrack-CMV上并用PmeI线性化后,转化含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的E.coliBJ5183感受态细胞进行同源重组,得到重组质粒pAd-FABP4,并用PacI酶切鉴定.将经过PacI线性化的pAd-FABP4转染HEK 293A细胞进行病毒包装和扩增,TCID50法测定病毒滴度.[结果]经测序鉴定本次克隆的FABP4序列与GenBank收录的一致. 酶切鉴定、绿色荧光观察、PCR及测序检测均证明,重组腺病毒载体构建成功并获得重组腺病毒AD-FABP4,病毒滴度为1.58×109 PFU·mL-1.[结论]成功构建了秦川牛FABP4基因重组腺病毒载体并获得高滴度的重组腺病毒.