抗B型葡萄球菌肠毒素高亲和力单链抗体的制备

• 作者: 周幸春 孙元杰 宋朝君 张葵 李永明 杨琨 金伯泉 魏玉英
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: B型葡萄球菌肠毒素 重链和轻链可变区基因 单链抗体 原核表达 ELISA Western blot
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 403-406
• 分类号: R392.11|R378.1+1
• 语种: 中文

摘要

目的 构建针对B型葡萄球菌肠毒素(SEB)的特异性单链抗体(scFv),并进行纯化和鉴定.方法 设计抗SEB高亲和力单克隆抗体(mAb) FMU-SEB-No.2重链和轻链可变区基因片段VH和VL的引物,利用RT-PCR技术,从本室制备的抗SEBmAb FMU-SEB-No.2杂交瘤细胞株中扩增出VH和VL基因片段；然后通过在轻链引物上设计linker序列,重叠引物延伸法(SOE)将VH和VL基因拼接成scFv基因片段,并将其克隆入原核表达载体PGEX4T-1中；转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,融合蛋白经谷胱甘肽亲和层吸柱纯化.采用SDS-PAGE,Western blot,ELISA等方法对其表达水平和特异性进行分析.结果 成功从1株抗SEB mAb FMU-SEB-No.2杂交瘤细胞株中扩增出VH和VL可变区基因,并通过linker序列将其拼接成scFv片段,大小约750 bp,编码250个氨基酸.PCR、酶切鉴定和测序结果表明表达载体构建成功.转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导后,以可溶形式表达相对分子质量(Mr)约54 000的融合蛋白.经谷胱甘肽亲和层析法纯化融合蛋白,可获得纯度达90％以上的scFv,ELISA和Western blot法检测结果表明,可溶性scFv与抗原SEB有较强的结合活性.结论 成功构建并表达出抗SEB的特异性单链抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	金伯泉	第四军医大学基础医学院免疫学系	232	1174	16.0	21.0
2	宋朝君	第四军医大学基础医学院免疫学系	54	195	7.0	11.0
3	魏玉英	第四军医大学基础医学院免疫学系	8	10	2.0	2.0
4	周幸春	第四军医大学基础医学院免疫学系	11	23	3.0	4.0
5	张葵	第四军医大学基础医学院免疫学系	19	36	4.0	4.0
6	李永明	第四军医大学基础医学院免疫学系	62	439	12.0	17.0
7	孙元杰	第四军医大学基础医学院免疫学系	9	17	3.0	3.0