TGEV S基因原核表达及表达蛋白间接ELISA方法的建立与初步应用

• 作者: 刘莹 宋阳 胡桂学 鲁娜
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 农学
• 关键词: 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) S蛋白 原核表达 间接酶联免疫吸附试验(ELISA) 应用
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 遗传育种与繁殖
• 页码范围: 39-43
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

为了建立检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),试验参照GenBank公布的TGEV TH-98株S基因序列,设计合成1对引物,RT-PCR扩增相应的核苷酸片段.将PCR扩增产物连接至原核表达载体pET-32a中,以大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞为表达菌株进行诱导表达.再以纯化重组蛋白作为诊断抗原,通过探索最佳抗原包被量和抗体血清稀释倍数等参数建立检测TGEV S蛋白抗体的间接ELISA方法.结果表明:试验成功克隆了TGEV S基因,扩增片段长度为4 003 bp;构建了重组表达质粒pET-S,并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中获得高效表达,表达蛋白分子质量约为148 ku；经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western-blot分析显示,重组蛋白具有良好的抗原性；以纯化的S重组蛋白作为包被抗原,建立了TGEV S蛋白抗体检测间接ELISA方法；该ELISA方法的抗原最佳包被浓度为18.85 μg/mL,最适血清稀释比例为1:40.