优化重组人C-反应蛋白在酵母中的分泌表达

• 作者: 张立超 李军明 林衡 胡学军 葛高顺
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 关键词: C-反应蛋白 毕赤酵母 信号肽 分泌表达
• 年，卷（期）: 2013,（19）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3113-3116
• 页数: 4页
• 字数: 2608字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2013.19.005

摘要

目的:通过优化引导蛋白分泌的信号肽(signal peptide,SP),构建高效分泌表达具有免疫活性的重组人C-反应蛋白(recombinant human C-reactive protein,rhCRP)的毕赤酵母菌株.方法:通过重叠PCR和DNA重组技术,分别将信号肽MFα SP、CRN SP、SUC2 SP和MFα-op SP的基因重组到rhCRP基因的5’端后克隆到毕赤酵母表达载体上,获得的4种重组质粒分别重组到毕赤酵母菌X-33中进行甲醇诱导分泌表达,Western blot法鉴定蛋白分泌情况;利用HisTrap HP柱纯化rhCRP后用间接ELISA法鉴定其免疫反应性.结果:成功构建了4种重组质粒.4种SP能引导表达出大小约为23 kD的rhCRP,其中MFα SP引导rhCRP分泌的量约为另外3种信号肽的3～12倍.间接ELISA检测表明,纯化的rhCRP具有特异的免疫反应性.结论:成功筛选出了高效分泌表达rhCRP的重组毕赤酵母菌株并表达、纯化得到具有免疫反应性的rhCRP,为rhCRP相关的进一步临床及基础研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡学军	大连大学医学院	15	40	4.0	5.0
2	林衡	大连大学医学院	7	15	2.0	3.0
3	李军明	大连大学医学院	6	9	1.0	2.0
4	葛高顺	大连大学医学院	7	13	2.0	3.0
5	张立超	大连大学医学院	7	13	2.0	3.0