新城疫病毒荧光RT-PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 商雨 温国元 王红琳 程国富 罗青平 胡薛英 邵华斌 郭静
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 荧光RT-PCR 新城疫病毒 F基因
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1159-1162
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

经对部分发表在NCBI里的新城疫病毒序列进行比对,在其F基因上找到1段相对保守序列,根据保守序列设计1对引物和1条TaqMan探针,以新城疫Ⅰ系疫苗株(Mukteswar株)作为标准品,通过系列条件优化、特异性、灵敏性和重复性试验,建立了一种灵敏度高、特异性强和重复性好的荧光RT-PCR检测新城疫病毒的方法.该方法能检测最低初始病毒浓度为102.2 ELD50/mL,且在108.2～102.2 ELD50/mL内Ct值与病毒浓度的对数值(lgELD50/mi)呈很好的线性关系,R2达到0.997 5；该方法对禽流感、禽痘病毒和禽大肠杆菌等禽病病原核酸无交叉反应；批间和批内重复性良好；临床样品检测中荧光RT-PCR与鸡胚分毒的符合率、诊断灵敏度和诊断特异性分别为98.5％,50.0％和98.4％.因此,荧光RT-PCR检测方法的建立为新城疫病毒检测提供了一种快速有效的方法,为新城疫病毒的研究奠定了一定的基础.