徐淮山羊SCD1基因的克隆和亚细胞定位研究及转基因小鼠的制备

• 作者: 刘志永 张亚妮 朱才业 李伟 李碧春 王丹 郑蒙蒙 韦光辉
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 徐淮山羊 硬脂酰辅酶A脱氢酶 真核表达 NIH-3T3细胞 荧光蛋白 转基因鼠
• 年，卷（期）: 2013,（17）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·资源昆虫
• 页码范围: 3695-3703
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.17.019

摘要

[目的]克隆徐淮山羊硬脂酰辅酶A脱氢酶1(SCD1)基因的cDNA并分析该基因生物信息学功能.通过EGFP融合蛋白在亚细胞水平定位该基因表达产物,研究该基因在异种动物体内表达情况,探索制备异种转基因动物的可能性及外源基因能否稳定遗传.[方法]采用RT-PCR方法从徐淮山羊脂肪组织中克隆SCD1基因cDNA,进行生物信息学分析,并构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合表达载体pEGFP-C1-SCD1.脂质体(LTX)介导基因转染NHI-3T3细胞,48h后荧光倒置显微镜下观察基因表达产物的分布,RT-PCR检测mRNA在体外水平的表达.利用睾丸注射法制备转基因小鼠,在F1代和F2代个体DNA水平和蛋白水平上检测目的基因的表达情况.[结果]成功克隆出徐淮山羊SCD1基因的全序列cDNA,大小为1 074 bp,编码357个氨基酸,GenBank 登录号为JX854036,徐淮山羊SCD1序列与人、褐家鼠、小家鼠、绵羊、牛和野猪相应编码区的同源性分别为86％、83％、82％、98％、95％、90％,氨基酸序列同源性分别为84％、79％、79％、96％、92％、95％;成功构建了融合表达载体pEGFP-C1-SCD1; RT-PCR检测mRNA表达明显;EGFP-SCD1融合蛋白定位在NIT-3T3细胞质中,与在线软件预测一致;通过尾静脉注射和睾丸注射,该基因可以在小鼠体内暂态表达和持续性表达,且可以稳定遗传.[结论]体外克隆的徐淮山羊SCD1基因cDNA在单细胞水平上表达于细胞质中,在小鼠体内也可以表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李伟	扬州大学动物科学与技术学院	59	185	8.0	10.0
2	王丹	扬州大学动物科学与技术学院	48	68	5.0	5.0
3	张亚妮	扬州大学动物科学与技术学院	40	56	4.0	6.0
4	郑蒙蒙	扬州大学动物科学与技术学院	6	16	3.0	4.0
5	朱才业	扬州大学动物科学与技术学院	4	9	1.0	3.0
6	韦光辉	扬州大学动物科学与技术学院	6	9	1.0	3.0
7	刘志永	扬州大学动物科学与技术学院	2	5	1.0	2.0