褐色橘蚜中柑橘衰退病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

• 作者: 刘金香 周常勇 周彦 唐科志 李中安 李玲娣 王永江 田晓
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 褐色橘蚜 柑橘衰退病毒 实时荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 525-533
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.03.009

摘要

[目的]建立SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR方法,测定褐色橘蚜(Toxoptera citricida)中柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)含量.[方法]根据CTV CP25保守序列,设计特异性引物HD-F/R,通过优化得到最佳反应条件建立橘蚜中CTV实时荧光定量RT-PCR,并进行灵敏性、重复性检验,评价该方法的可行性.应用该方法测定单头橘蚜中CTV含量.[结果]该实时荧光定量RT-PCR方法最低检测限为9.0拷贝/μL,其灵敏度是常规RT-PCR的100倍.标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关性系数为0.998,扩增效率达104.7％.批内和批间变异系数均小于3.24％,表明该方法重现性好.获毒24 h单头橘蚜中CTV最低含量为2.5×103拷贝,最高含量为1.24×106拷贝.[结论]本研究建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法能够准确检测褐色橘蚜中的CTV,可用于研究褐色橘蚜-CTV-寄主互作关系及CTV的流行.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周彦	中国农业科学院柑桔研究所	25	265	10.0	15.0
2	周常勇	中国农业科学院柑桔研究所	67	764	16.0	23.0
3	唐科志	中国农业科学院柑桔研究所	22	265	10.0	15.0
4	王永江	中国农业科学院柑桔研究所	6	100	6.0	6.0
5	李中安	中国农业科学院柑桔研究所	15	182	10.0	13.0
6	李玲娣	西南大学园艺园林学院	4	30	2.0	4.0
8	田晓	西南大学园艺园林学院	4	30	2.0	4.0