5-Aza-CdR对人食管鳞癌Kyse-140细胞BNIP3基因甲基化生物学意义的研究

• 作者: 于振涛 张洪典 胡珊珊 陈传贵 马钊
• 来源期刊: 中华肿瘤防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 癌,鳞状细胞 食管肿瘤 细胞系,肿瘤 腺病毒科 甲基化 5-氮杂-2＇-脱氧胞苷
• 年，卷（期）: 2013,（15）
• 所属期刊栏目: 前沿报道/论著
• 页码范围: 1132-1136
• 分类号: R735.7
• 语种: 中文

摘要

目的:研究DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2＇-脱氧胞苷(5-azacytidine-2＇-deoxvcytidines,5-Aza-CdR)对人食管癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC) Kyse-140细胞系中Bcl-2/腺病毒E1B 19×103相关蛋白3(BNIP3)基因启动子区甲基化的转录调控以及对细胞生长、增殖的影响.方法:培养ESCC Kyse-140细胞,用不同浓度的5-Aza-CdR处理细胞后,倒置显微镜下观察细胞形态的变化,MTT比色法检测5-Aza-CdR对Kyse-140细胞增殖能力的影响；应用甲基化特异性PCR(MSP)、反转录聚合酶链(RT-PCR)及蛋白质印迹法分析经5-Aza-CdR处理前后BNIP3基因甲基化状态及mRNA和蛋白表达水平的变化.结果:倒置显微镜下显示,经5-Aza-CdR处理后,可见细胞增殖速度减慢,体积变小,形态趋于规则,密度降低,细胞间接触变松,核固缩,核分裂像减少,部分细胞有死亡,随药物浓度的增加该趋势更加明显.MTT检测发现,经1×10－7、5×10－7、2×10－6、1×10－5和5×10－5 mol/L的5-Aza-CdR处理后,24 h时Kyse-140细胞生长抑制率分别为6.2％、8.4％、11.3％、15.8％和26.0％,48 h时分别为8.1％、15.2％、20.4％、24.6％和39.0％,72 h分别为9.3％、20.5％、30.1％、40.9％和51.0％,随作用时间的增长细胞抑制率明显升高.方差分析显示,5-Aza-CdR对Kyse-140细胞生长有抑制作用,呈浓度依赖性(F=18.211,P＜0.01)和时间依赖性(F=15.411,P=0.002).BNIP3基因在Kyse-140细胞中呈高甲基化状态,在mRNA和蛋白水平表达阴性；5-Aza-CdR可逆转BNIP3基因的甲基化状态,恢复BNIP3 mRNA和蛋白水平的表达,并随药物浓度的增加表达增高.结论:5-Aza-CdR能够逆转BNIP3基因在ESCC Kyse-140细胞株中高甲基化状态,解除DNA高甲基化导致的基因沉默,从而恢复其mRNA和蛋白水平的表达,同时显著抑制细胞的生长和增殖能力.