周期型马来丝虫复合基因真核表达体系的建立

• 作者: 徐怿琳 徐邦生 方政 方浩 王慧 钱一言 陆施娟
• 来源期刊: 现代预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 周期型马来丝虫 3-磷酸甘油醛脱氢酶 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 复合基因 重组蛋白
• 年，卷（期）: 2013,（23）
• 所属期刊栏目: 实验技术及其应用
• 页码范围: 4389-4392
• 分类号: R459.5
• 语种: 中文

摘要

目的 将含周期型马来丝虫3-磷酸甘油醛脱氢酶(BmGAPDH)和半胱氨酸蛋白酶抑制剂(BmCPI)复合基因的重组质粒pcDNA3.1(+)-BmCPL/BmGAPDH转染人宫颈癌细胞(Hela)细胞获得复合重组质粒稳定转染细胞株,并纯化所表达的重组蛋白,为研制新型的抗周期型马来丝虫重组蛋白疫苗提供理论及实验依据.方法 将成功构建的pcDNA3.1(+)-BmCPI/BmGAPDH和空载体pcDNA3.1(+)分别转染Hela细胞,以G418筛选转染细胞,进而通过RT-PCR和SDS-PAGE鉴定G418筛选后的单克隆抗性细胞株.对阳性克隆进行无血清悬浮培养,收集细胞及其培养液.亲和层析纯化所表达的重组蛋白并通过Western-blotting对纯化的重组蛋白进行生物学鉴定.结果 重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI/BmGAPDH经转染Hela细胞,G418持续筛选14 d获得稳定表达.表达产物经Western-blotting法鉴定能够与相应的免疫鼠血清反应,相对分子质量Mr约为54×103.结论 成功建立了周期型马来丝虫复合重组质粒pcDNA3.1 (+)-BmCPI/BmGAPDH稳定转染细胞株并获得了相应的重组蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐邦生	南通大学医学院病原生物学教研室	36	108	6.0	8.0
2	方政	南通大学医学院病原生物学教研室	23	64	5.0	6.0
3	钱一言	南通大学医学院病原生物学教研室	1	2	1.0	1.0
4	徐怿琳	南通大学医学院病原生物学教研室	1	2	1.0	1.0
5	陆施娟	南通大学医学院病原生物学教研室	8	5	2.0	2.0
6	王慧	南通大学医学院病原生物学教研室	12	12	2.0	2.0
7	方浩	南通大学医学院病原生物学教研室	5	9	2.0	2.0