大鼠血小板衍生生长因子C重组腺病毒载体的构建及在内皮祖细胞中的表达

• 作者: 付健 唐博 孙建明 李锋 罗文军 陈以宽
• 来源期刊: 重庆医学
• 关键词: 血小板衍生生长因子C pAD/CMV/V5-DEST腺病毒载体 内皮祖细胞 转染
• 年，卷（期）: 2013,（16）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1837-1840
• 页数: 4页
• 字数: 3146字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2013.16.016

摘要

目的 构建含大鼠血小板衍生生长因子C(PDGF-C)基因的pAD-EGFP-PDGF-C的重组腺病毒表达载体,体外转染骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)并观察目的基因蛋白及mRNA表达情况.方法 通过逆转录聚合酶链式反应技术(RT-PCR)法从pIRES2-EGFP-PDGF-C真核表达载体中获得PDGF-C目的片段,经BP重组与LR重组插入到pAD/CMV/V5-DEST,构建pAD-PDGF-C-IRES2-EGFP腺病毒载体.酶切及DNA测序鉴定后转染HEK293A包装、纯化,测定病毒滴度后转染大鼠骨髓源性EPCs,应用Real-time qPCR、蛋白免疫印迹法(Western blotting)等方法检测PDGF-C蛋白及mRNA的表达.结果 核酸内切酶消化及PCR分析证实PDGF-C基因成功插入pAD/CMV/V5-DEST腺病毒载体,转染后荧光显微镜下观察可见绿色荧光蛋白表达,转染48 h后实时定量酵素聚合反应技术(Real-time qPCR)测定EPCs中PDGF-C含量明显提高(P＜0.05),Wester blotting检测证实在46×103存在特异性条带.结论 成功构建了大鼠PDGF-C基因的腺病毒表达载体pAD-EGFP-PDGF-C,体外转染大鼠骨髓源性EPCs能高效表达目的基因产物,为后续研究PDGF-C基因功能以及进一步开展基因治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈以宽	重庆医科大学附属第二医院血管外科	45	264	9.0	15.0
2	孙建明	重庆医科大学附属第二医院血管外科	39	290	10.0	16.0
3	李锋	重庆医科大学附属第二医院血管外科	10	64	3.0	8.0
4	罗文军	重庆医科大学附属第二医院血管外科	37	273	10.0	14.0
5	唐博	重庆医科大学附属第二医院血管外科	22	137	7.0	11.0
6	付健	重庆医科大学附属第二医院血管外科	6	19	2.0	4.0