弓形虫棒状体蛋白2多克隆抗体制备纯化及其在免疫荧光定位中的运用

• 作者: 廖启彬 张丽 彭鸿娟 胡琳 陈艾媛 魏海霞
• 来源期刊: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 刚地弓形虫 棒状体蛋白2 多克隆抗体 免疫荧光定位
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 34-37
• 分类号: R382.5
• 语种: 中文

摘要

目的 制备弓形虫棒状体蛋白2 (ROP2)多克隆抗体并纯化. 方法 将已构建的重组质粒pET32a-ROP2转化人大肠埃希菌(E.coli) BL21 (DE3)中,用0.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白ROP2,分离上清和包涵体,包涵体洗涤后,用尿素溶解；取纯化蛋白与等体积福氏完全佐剂或不完全佐剂混合,背部皮下免疫新西兰大白兔3次,200 μg/次,3次免疫之间分别间隔14d和19d,末次免疫10d后收集兔血清,亲和纯化柱纯化,并用间接ELISA检测抗体效价,蛋白质印迹(Western blotting)分析抗体特异性.将弓形虫速殖子感染人包皮成纤维细胞(HFF细胞),利用制备所得的多克隆抗体采用免疫荧光法检测ROP2在感染细胞中的定位.结果 通过诱导表达,获得重组蛋白ROP2,制备的兔源性ROP2抗体纯化后为单一蛋白抗体.间接ELISA结果显示,抗体滴度为1∶102 400; Western blotting结果显示,抗体特异性良好.同时,免疫荧光定位试验结果显示,ROP2定位在弓形虫的纳虫泡膜上. 结论 本研究制备并纯化了抗弓形虫ROP2的兔源性多克隆抗体,并成功应用于ROP2在弓形虫纳虫泡膜上的免疫荧光定位试验.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	彭鸿娟	南方医科大学公共卫生与热带医学院病原生物学系	27	202	9.0	13.0
2	张丽	南方医科大学公共卫生与热带医学院病原生物学系	34	293	10.0	16.0
3	陈艾媛	南方医科大学公共卫生与热带医学院病原生物学系	2	3	1.0	1.0
4	魏海霞	南方医科大学公共卫生与热带医学院病原生物学系	3	3	1.0	1.0
5	廖启彬	南方医科大学公共卫生与热带医学院病原生物学系	1	1	1.0	1.0
6	胡琳	南方医科大学公共卫生与热带医学院病原生物学系	1	1	1.0	1.0