逆转录法筛选mRNA靶点设计核酶对GPA的表达干预实验研究

• 作者: 付怀秀 付辉 崔玉芳 李菲菲 毛建平 马琼
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 血型糖蛋白A mRNA 靶点 Ribozyme 慢病毒 K562细胞
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 84-90
• 分类号: Q522|Q752|R914.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20140312

摘要

采用自行设计5'固定3'随机的文库对基因mRNA进行杂交用于逆转录反应以筛选mRNA的寡核苷酸结合靶点.对人Ⅰ型跨膜糖蛋白—血型糖蛋白A(glycophorin A,GPA)的mRNA筛选了4个反义寡核苷酸可结合靶点,分别设计反义核酸(Antisense),分别加入mRNA中用RNase H验证各靶点的核酸结合和切割效率,最终确定2个高效结合和切割靶点.再设计Ribozyme,构建表达核酶(Ribozyme)质粒,利用慢病毒(Lentivirus)包装技术,感染人源红系白血病细胞株K562细胞,在细胞水平验证其下调GPA基因表达的效果,对转染细胞mRNA进行反转录和Real TimePCR分析mRNA表达水平,并在蛋白水平进行了Western Blot分析.结果表明文库结合逆转录方法筛选靶点设计的Ribozyme具有高效率下调膜受体表达的作用,GPA为Ⅰ型跨膜糖蛋白,该实验为筛选mRNA靶点提供参考方法,并对膜受体表达干预有参考价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	崔玉芳	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	50	468	13.0	20.0
2	毛建平	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	32	261	8.0	15.0
3	李菲菲	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	7	25	3.0	4.0
4	马琼	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	9	20	2.0	4.0
5	付辉		4	20	3.0	4.0
7	付怀秀	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	2	5	2.0	2.0