对氧磷酶1融合蛋白的表达及其生物活性

• 作者: 吴小锋 尚艳楠 张世勇 查晓丹 王丽兴 蒲韵竹 赵宝全 赵恩峰 陈怡君
• 来源期刊: 国际药学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 家蚕表达 蛋白转导域 对氧磷酶1 生物活性
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 358-362,373
• 页数: 6页
• 分类号: R965
• 字数: 4824字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13220/j.cnki.jipr.2014.03.018

摘要

目的：利用家蚕表达系统表达含蛋白转导肽P11的人血清对氧磷酶1（paraoxonase 1，PON1）融合蛋白，并对其抗敌敌畏（dichlorvos，DDVP）毒性的生物活性进行初步研究。方法 P11-PON1融合基因构建于家蚕表达载体pFastBac 5B多克隆位点，转化家蚕DH10BmBac 感受态细胞，收集病毒粒子并感染家蚕5龄幼虫，感染96 h 后，收获蛋白；SDS-PAGE 电泳分析P11-PON1融合蛋白占家蚕总蛋白比例，计算蛋白含量；利用小鼠和斑马鱼鉴定P11-PON1融合蛋白抗DDVP毒性的生物活性；每只小鼠灌胃或直肠给P11-PON1融合蛋白1mg，给药后立刻和3 h后，腹腔注射DDVP溶液20 mg/kg，观察小鼠中毒状态，计算存活率；P11-PON1融合蛋白溶于斑马鱼养殖水中，浓度分别为1、2.5、5、10和20 mg/L，给药后立刻和3 h 后加入终浓度为50 mg/L的DDVP溶液染毒，观察斑马鱼的行为变化，计算存活率。结果成功表达了P11-PON1融合蛋白，该蛋白占家蚕5龄虫总蛋白的8%；灌胃给予P11-PON1融合蛋白没有提高染毒小鼠的存活率；直肠给药后立刻染毒也没有显著提高小鼠存活率，而直肠给药3 h后再腹腔注射DDVP染毒，小鼠存活率显著提高（P<0.01）；斑马鱼给予P11-PON1融合蛋白后立即染毒DDVP，斑马鱼存活率并没有显著性提高，而给予P11-PON1融合蛋白3 h后再染毒DDVP，斑马鱼存活率显著提高，其中融合蛋白20和10 mg/L组24 h存活率均为62.5%，5 mg/L组存活率为50%，与对照组相比，差异显著提高（P <0.01）；2.5 mg/L组存活率为41.7%，与对照组相比差异有显著提高（P <0.05）。结论家蚕能够表达P11-PON1融合蛋白，该融合蛋白提前给药能降低DDVP对小鼠和斑马鱼的毒性作用。