芽孢杆菌植酸酶phy(ycD)基因在大肠杆菌中的异源表达与纯化

• 作者: 付月君 卢文亮 姚明泽 梁爱华 王茜 胡风云
• 来源期刊: 应用与环境生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 中性植酸酶 基因表达 纯化 酶学性质
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 295-299
• 页数: 5页
• 分类号: Q936|Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1145.2014.00295

摘要

为研究中性植酸酶的性质,将芽孢杆菌来源植酸酶基因phy(ycD)构建到大肠杆菌表达载体pET-28a(+)上,进行诱导表达,利用Ni-NAT和Superdex-75纯化后,对重组植酸酶r-phy(ycD)的性质进行分析.结果显示,该酶是Ca2+依赖性酶,Ca2+最适浓度为1 mmol/L,酶比活为4.7 U/mg,酶促反应的最适pH为6.5,在中性条件下稳定,最适反应温度为45℃,Km值和Vmax值分别为0.213 mmol/L和5.55 U/mg.Zn2+、Ni2+、Ba2+和Ag2对酶促反应均有显著抑制作用.本研究表明,Ca2+对该类酶的活性和热稳定性起着关键性作用,因此在表达和纯化过程中需要在培养基和纯化所需的各类缓冲液中添加Ca2+.图3表1参22