杉木SRAP-PCR体系优化

• 作者: 徐阳 施季森 王新民 王颖 赵亚琦 郑仁华 陈金慧
• 来源期刊: 南京林业大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 杉木 SRAP-PCR 体系优化
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 15-20
• 页数: 6页
• 分类号: S722|Q81
• 字数: 5015字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2006.2014.01.003

摘要

为建立杉木SRAP-PCR反应体系，利用L16（45）正交设计对影响杉木SRAP-PCR反应体系的Mg2＋、dNTPs、引物、Taq酶和DNA浓度5种因素的4个水平进行优化实验，结合正交直观分析和方差分析，对影响反应较大的Mg2＋、dNTPs和引物浓度进行单因素实验，最终确定杉木SRAP-PCR最佳的反应体系为：在20μL的PCR反应体系中，Mg2＋浓度为2．25 mmol/L、dNTPs为0．15 mmol/L、引物浓度为0．4μmol/L、Taq酶为1．5μmol/min、模板DNA为60 ng，10×PCR Buffer 2μL，不足部分用双蒸水补充至20μL。 PCR反应程序的两步最适退火温度第1步为35℃，第2步为53℃。利用上述反应体系进行杉木PCR扩增，能得到清晰、稳定的条带。