禽网状内皮组织增生症病毒p30-gp90串联表达蛋白及其免疫原性

• 作者: 刘正伟 李延鹏 郭凯 陈瑞爱
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 医学
• 关键词: 禽网状内皮组织增生症病毒 p30 gp90 免疫原性
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 352-358
• 分类号: R392
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.2014.03.013

摘要

[目的]研究禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis Virus,REV)群特异性抗原P30与囊膜糖蛋白gp90体外共表达蛋白的免疫原性,为研发新型REV抗体诊断试剂盒提供基础.[方法]根据REV脾脏坏死病毒(spleen necrosis virus,SNV)株的前病毒基因组cDNA序列,设计合成2对引物,以pPB101质粒为模板,分别扩增REV p30基因和gp90基因片段.将PCR产物依次克隆入表达载体pET-28a(+)中,通过酶切鉴定和测序分析,筛选阳性重组克隆pET-p30-gp90.重组菌经异丙基硫代D-半乳糖苷(IPTG)诱导后,通过SDS-PAGE电泳分析表达情况,Western blot检测表达蛋白与特异性血清之间的反应性.制备表达蛋白的抗血清,以该抗血清与REV感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)进行间接免疫荧光实验(IFA),验证表达蛋白的免疫原性.[结果]经SDS-PAGE电泳后能观察到预期大小的表达条带,Western blot结果显示,重组蛋白能与REV抗血清反应.将表达产物纯化后免疫Balb/c小鼠,制备p30-gp90抗血清,该抗血清与REV感染CEF在IFA中呈现特异性荧光反应.[结论]体外串联表达REV p30-gp90蛋白,表达蛋白具有良好的免疫原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈瑞爱	华南农业大学兽医学院	33	113	6.0	8.0
5	郭凯	华南农业大学兽医学院	8	31	4.0	5.0
6	刘正伟	华南农业大学兽医学院	7	30	4.0	5.0
7	李延鹏	中国农业科学院生物技术研究所	9	87	5.0	9.0