Tgf2转座系统在转RFP基因斑马鱼上的应用

• 作者: 叶星 吴芳 孙成飞 张莉莉 田园园 白俊杰 邹曙明
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: Tgf2转座子 斑马鱼 转基因 红色荧光蛋白 整合率
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 647-654
• 页数: 8页
• 分类号: S962.1
• 字数: 5798字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2014.00647

摘要

提高目的基因的转植效率与可遗传效率是转基因鱼研制的关键点之一。本研究利用近年开发的金鱼转座子系统进行转基因斑马鱼的研制,探讨其在转基因鱼上应用的可行性。通过 PCR 方法,改造 Tgf2转座子供体质粒pTgf2-EF1α-eGFP,将肌球蛋白轻链2启动子(mylz2)与红色荧光蛋白基因(RFP)定向插入其中,构建可在肌肉组织特异性表达红色荧光蛋白的Tgf2转座子供体质粒pTgf2-Mylz2-RFP。通过显微注射,将Tgf2转座子供体质粒与Tgf2转座酶mRNA共注射于斑马鱼(Danio ririo)受精卵中,共注射受精卵972粒,出膜后存活的仔鱼803尾,其中携带外源基因的仔鱼为615尾,阳性率为76.6%。转红色荧光蛋白基因斑马鱼首代F0培育至性成熟,将其中的10尾F0斑马鱼分别与野生型斑马鱼进行配对繁殖,其中1个组合产生了体表呈现均匀红色荧光的F1个体,因此RFP在F0的整合率为10%。将红色荧光F1个体培育至性成熟并与野生型鱼配对繁殖, F2的阳性个体占69%。本研究结果说明,由 Tgf2转座子介导的转基因技术,可有效提高目的基因的转植效率与整合效率,在转基因鱼构建以及相关研究中具有开发应用前景。