金鱼Tgf2转座酶的原核表达及其DNA结合活性

• 作者: 卢梦琪 司蕊蕊 蒋霞云 赵茜 邹曙明
• 来源期刊: 上海海洋大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: Tgf2 转座酶 原核表达 DNA结合活性
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 水产生物技术
• 页码范围: 339-347
• 页数: 9页
• 分类号: S917
• 语种: 中文
• DOI: 10.12024/jsou.20161001881

摘要

金鱼Tgf2转座子基因属于Hobo/Activator/Tam3(hAT)超家族,其编码的活性转座酶能在多种鱼类转座中介导基因插入及诱变,因此在鱼类重要性状主控基因的筛选、功能解释及育种等方面具有重要的应用前景.鉴于Tgf2转座酶基因(JN886591)存在众多稀有密码子,本研究依据大肠杆菌对密码子的偏好性,对金鱼Tgf2转座酶基因进行密码子优化,所得Tgf2转座酶基因连接原核表达载体pET-28a(+),将重组载体转化到大肠杆菌BL21 (DE3)细胞.该大肠杆菌细胞在培养温度37℃、OD600≈0.5时用IPTG诱导获得高效表达,即菌体中含有8.8％的重组蛋白,上清液中含有4.0％重组蛋白.采用亲和层析纯化从菌体上清液中分离得到分子量约70 ku的可溶性重组蛋白,经MALDI-(TOF)/TOF串联质谱鉴定其为重组Tgf2转座酶.进而采用分子排阻色谱法研究转座酶的DNA结合活性,结果表明:所得重组Tgf2转座酶能识别并结合含Tgf2转座子特异性亚末端重复序列的DNA探针,即启动转座.采用原核表达体系高效获得重组Tgf2转座酶,为其作为工具酶应用于鱼类生物学研究奠定必要的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蒋霞云	上海海洋大学食品学院	33	219	8.0	14.0
5	邹曙明	上海海洋大学农业部种质资源与利用重点开放实验室	34	235	8.0	14.0
6	司蕊蕊	上海海洋大学食品学院	2	3	1.0	1.0
7	赵茜	上海海洋大学食品学院	1	2	1.0	1.0
8	卢梦琪	上海海洋大学食品学院	2	3	1.0	1.0