PAX3基因重组真核细胞表达质粒的构建、表达及意义

• 作者: 冯永 张华 李家大 梅凌云 罗浑金 贺楚峰 陈红胜
• 来源期刊: 听力学及言语疾病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Waardengurg综合征 PAX3 基因突变 体外实验
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 67-72
• 页数: 6页
• 分类号: R764.43
• 字数: 5434字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-7299.2014.01.017

摘要

目的：通过构建PAX3基因及其突变体表达质粒初步研究其外源性表达和定位表达，为研究Waar-denburg综合征（Waardenburg syndrome ，WS）发病机制提供实验基础。方法通过分子克隆技术双酶切pECE -PAX3和pcDNA3．0-HA后连接构建PAX3基因重组真核细胞表达质粒pcDNA3．0-PAX3-HA ，以其为模板分别构建PAX3基因新发突变H80D和H186fs表达质粒pcDNA3．0-H80D-HA和pcDNA3．0-H186fs-HA ， DNA测序鉴定。将PAX3、H80D和H186fs表达质粒分别瞬时转染小鼠胚胎成纤维细胞（NIH3T3细胞），采用Western blot和细胞免疫荧光法分别检测和观察野生PAX3蛋白和突变 H80D、H186fs蛋白在NIH3T3细胞中的表达和分布。结果 PAX3及其突变体 H80D和H186fs表达质粒经DNA测序鉴定序列正确，三者在NIH3T3细胞中正确表达，H80D与PAX3仅在细胞核中分布，H186fs在细胞质与细胞核中均有分布。结论本研究成功构建了PAX3基因及其突变体真核细胞表达质粒，突变对PAX3蛋白的亚细胞定位产生影响，为在体外实验进一步研究国人PAX3基因突变致WS发病的分子机制奠定了实验基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张华	新疆医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科	246	1096	15.0	21.0
2	冯永	中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科	102	545	12.0	16.0
3	梅凌云	中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科	43	225	9.0	13.0
4	贺楚峰	中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科	40	202	9.0	12.0
5	陈红胜	中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科	18	70	5.0	7.0
6	李家大	中南大学医学遗传学国家重点实验室	11	12	2.0	3.0
7	罗浑金	中南大学医学遗传学国家重点实验室	5	9	2.0	3.0