MITF基因重组真核细胞表达质粒的构建、表达及意义

• 作者: 冯娟 冯永 张华 李家大 梅凌云 罗浑金 贺楚峰 陈红胜
• 来源期刊: 中华耳科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Waardengurg综合征 MITF 基因突变 分子克隆技术 体外实验
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 136-141
• 页数: 6页
• 分类号: R394.112
• 字数: 5615字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-2922.2014.01.032

摘要

目的：通过构建基因MITF及其突变体表达质粒初步研究其外源性表达和定位表达，为研究Waardenburg综合征（Waardenburg syndrome，WS）发病机制提供一定的实验依据和基础。方法通过分子克隆技术双酶切pCMV-MITF和pCMV-Flag后连接构建MITF基因重组真核细胞表达质粒pCMV-MITF-Flag，以其为模板分别构建MITF基因新发突变R217I和T192fs表达质粒pCMV-R217I-Flag和pCMV-T192fs-Flag，DNA测序鉴定。MITF、R217I和T192fs表达质粒分别瞬时转染NIH3T3细胞或黑色素瘤UACC903细胞，Western blot和细胞免疫荧光分别检测和观察野生MITF蛋白和突变R217I、T192fs蛋白的表达和分布。结果MITF及其突变体R217I和T192fs表达质粒经DNA测序鉴定序列正确，三者在黑色素瘤UACC903细胞中正确表达，MITF和R217I仅在细胞核中分布，而T192fs仅在细胞质分布。结论成功构建了MITF基因及其突变体真核细胞表达质粒，突变对MITF蛋白的亚细胞定位产生影响，为在体外实验进一步研究国人MITF基因突变致WS发病的分子机制奠定了实验基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张华	新疆医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科	246	1096	15.0	21.0
2	冯永	中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科	102	545	12.0	16.0
3	梅凌云	中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科	43	225	9.0	13.0
4	贺楚峰	中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科	40	202	9.0	12.0
5	冯娟	新疆医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科	58	206	8.0	12.0
6	陈红胜	中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科	18	70	5.0	7.0
7	李家大	中南大学医学遗传学国家重点实验室	11	12	2.0	3.0
8	罗浑金	中南大学医学遗传学国家重点实验室	5	9	2.0	3.0