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Gluc-GFP 双标记系统的构建及验证
Gluc-GFP 双标记系统的构建及验证
作者:
吴晓燕
康晓平
张雨
张雪松
户义
李裕昌
杨银辉
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
双标记
Gluc-GFP
分子成像
病毒研究
摘要:
目的:构建含Gluc-GFP的双标记系统,为研究病毒的体外标记和活体成像提供技术手段。方法根据文献报道合成split-GFP基因,将GFP拆分为G1-10与G11两部分,分别构建含G1-10与G11的pcDNA3.1表达质粒并通过荧光观察验证其相互作用。然后通过融合PCR技术将Gluc基因与G11基因通过Linker连接并插入到pcDNA3.1上,与G1-10表达质粒共转染293T细胞,测定细胞上清中Gluc荧光素酶的活性,并进行GFP荧光观察。为了更方便对病毒进行细胞水平的观测和筛选,利用慢病毒表达系统构建能稳定表达G1-10的MDCK细胞系,再向细胞系中转染G11质粒,通过红色荧光蛋白( RFP)标记和嘌呤霉素的抗性对细胞系以及GFP活性进行筛选与验证。结果split-GFP基因共转染细胞后的荧光观察结果证实了split-GFP拆分策略的可行性。 Gluc-G11与G1-10质粒共转染后,细胞能够发出明亮的绿色荧光,上清中荧光素的活性也较高。在此基础上,建立的G1-10 MDCK细胞系能够稳定表达出G1-10,用G11质粒转染该细胞系后,可检测到GFP荧光。结论成功构建了含Gluc-GFP的双标记系统,split-GFP拆分策略可行,Gluc-G11不会影响荧光素酶Gluc的生理活性;G1-10细胞系的稳定表达可简化双标记系统的制备,为在细胞和活体水平研究病毒致病机制提供技术手段。
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文献信息
篇名
Gluc-GFP 双标记系统的构建及验证
来源期刊
中华微生物学和免疫学杂志
学科
关键词
双标记
Gluc-GFP
分子成像
病毒研究
年,卷(期)
2014,(11)
所属期刊栏目
检测技术
研究方向
页码范围
854-858
页数
5页
分类号
字数
3674字
语种
中文
DOI
10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2014.11.010
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研究主题发展历程
节点文献
双标记
Gluc-GFP
分子成像
病毒研究
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中华微生物学和免疫学杂志
主办单位:
中华医学会
出版周期:
月刊
ISSN:
0254-5101
CN:
11-2309/R
开本:
大16开
出版地:
北京市经济技术开发区经海二路38号
邮发代号:
2-55
创刊时间:
1981
语种:
chi
出版文献量(篇)
5865
总下载数(次)
10
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26456
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中华微生物学和免疫学杂志2000
中华微生物学和免疫学杂志1999
中华微生物学和免疫学杂志1998
中华微生物学和免疫学杂志2014年第9期
中华微生物学和免疫学杂志2014年第8期
中华微生物学和免疫学杂志2014年第7期
中华微生物学和免疫学杂志2014年第6期
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中华微生物学和免疫学杂志2014年第2期
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