人防御素6基因的克隆、亚克隆及在酵母中的分泌表达

• 作者: 单颖 卢颖 吴学敏
• 来源期刊: 微生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人防御素6 表达质粒 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 61-65
• 页数: 5页
• 分类号: Q93-3|Q78|R392
• 字数: 3266字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-7021.2014.03.012

摘要

探讨人防御素6(HD-6)在毕赤酵母中表达的可行性,为进一步研究HD6的功能提供理论依据和实验基础.采用PCR方法,设计引物从cDNA文库中扩增出人α防御素6基因片段,并将其插入到克隆载体pMD-18T中,再与毕赤酵母表达载体pPICZαA重组,以得到重组的HD-6酵母表达载体pPICZαA/HD-6,并进行琼脂糖电泳和测序鉴定.再将构建好的毕赤酵母重组表达质粒pPICZαA/HD-6经Sac Ⅰ线性化后,应用LiCl法转化毕赤酵母菌株GS115感受态中,Zeocin平板筛选,PCR鉴定转化子.经摇瓶发酵和甲醇诱导,SDS-PAGE分析重组HD-6的表达.从cDNA文库中扩增出的HD-6基因片断大小正确;电泳和测序结果均证明已将此片段克隆到酵母表达载体pPICZαA内;线性化的重组质粒pPICZαA/HD-6成功转化进入毕赤酵母感受态中,PCR鉴定结果与预期相符;蛋白电泳证实重组HD-6在酵母中获得分泌表达.提示重组HD-6可以在毕赤酵母中实现分泌表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴学敏	辽宁医学院免疫学教研室	18	60	5.0	7.0
2	卢颖	辽宁医学院免疫学教研室	18	44	3.0	5.0
3	单颖	辽宁医学院免疫学教研室	21	55	4.0	6.0