牛疱疹病毒1型gE蛋白胞外区基因的杆状病毒表达及其表达产物的免疫反应性

• 作者: 刘杉杉 姜良 李永清 王天坤 黄秀芬
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 牛疱疹病毒1型 gE基因 胞外区 杆状病毒表达
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 页码范围: 915-920
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.1
• 语种: 中文

摘要

为获得具有生物学活性的牛疱疹病毒1型(BHV 1)囊膜糖蛋白gE,采用PCR方法从BHV 1感染的牛肾细胞全基因组中扩增出约1.7kb的gE基因,再将1 176 bp的gE胞外区基因片段克隆到新型杆状病毒载体pFastBac-LIC-Bse中,构建重组转移质粒pFB-gE.将pFB-gE转化到杆状病毒基因组的DH10Bac感受态细胞中,制备重组杆粒rBacmid-gE.将该重组杆粒的DNA转染昆虫细胞Sf9,获得与gE基因发生重组的杆状病毒.Western-blot分析及间接免疫荧光试验(IFA)的结果显示,重组杆状病毒在Sf9中表达了分子质量大小约为43 ku的gE融合蛋白,该融合蛋白分别与小鼠抗His标签单克隆抗体和小鼠抗BHV 1多克隆抗体发生特异性结合,表明获得的gE融合蛋白具有良好的免疫反应性.本研究为进一步获得高特异性的诊断抗原奠定了基础.