靶向miR-126慢病毒表达载体的构建及意义

• 作者: 刘娟 刘家秀 卢小东 杨学艺 邵启祥
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 微小RNA-126 CD4+ CD25+调节性T细胞 反义寡核苷酸 慢病毒
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 12-17
• 页数: 6页
• 分类号: R392.1
• 字数: 4545字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y130116

摘要

目的:检测微小RNA-126(microRNA-126,miR-126)在CD4+ CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)中的表达水平,同时构建基于慢病毒的miR-126反义寡核苷酸序列(antisense oligonucleotides,ASOs)表达载体.方法:实时定量PCR特异性探针法检测miR-126在Tregs中的表达水平;针对miR-126序列,设计合成其ASOs序列,退火后连接至经Age Ⅰ酶和EcoR Ⅰ酶双酶切的pGCsil-LV-GFP载体上,连接产物转化DH5α感受态细胞,对经PCR鉴定为阳性的载体(命名为pGCsil-miR-126-ASOs)进行测序分析;将构建成功的pGCsil-miR-126-ASOs表达质粒和pHelper l.0、pHelper 2.0质粒共转染293T细胞,浓缩病毒颗粒并测定所获病毒滴度;将制备好的病毒颗粒感染经TGF-β体外诱导培养的小鼠CD4+ CD62L+初始T细胞,72 h后用流式细胞仪检测其Foxp3的表达变化.结果:实时定量PCR结果显示miR-126在CD4+ CD25+ Tregs中的表达明显高于CD4+ CD25-T细胞(P＜0.01);测序结果证明成功构建pGCsil-miR-126-ASOs重组质粒载体,包装并获得高浓度的慢病毒颗粒,病毒滴度为9×108TU/mL;重组的病毒能明显抑制Tregs的外周诱导(P＜0.05).结论:成功构建miR-126 ASOs的慢病毒表达载体,并获得高浓度的病毒颗粒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘家秀	淮阴卫生高等职业技术学校检验药学系	23	94	5.0	7.0
2	杨学艺	江苏大学基础医学与医学技术学院	16	32	3.0	5.0
4	邵启祥	江苏大学基础医学与医学技术学院	78	336	9.0	14.0
5	刘娟	淮安市第四人民医院检验科	5	12	3.0	3.0
6	卢小东	江苏大学基础医学与医学技术学院	17	72	5.0	8.0