ToMV番茄坏死株系农杆菌侵染性克隆构建及其表达

• 作者: 刘妮娜 卢冉 廖乾生 程晓东
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 番茄花叶病毒(ToMV) 系统性坏死 农杆菌侵染性克隆 表达载体
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1027-1034
• 页数: 8页
• 字数: 5402字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2014.08.013

摘要

番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)是烟草花叶病毒属(Tobamovirus)的典型成员,该病毒侵染严重影响农作物的产量和质量.ToMV-N5株系能引起番茄(Lycopersicon esculentum)主栽品种(合作903)系统性坏死,建立该株系的侵染性克隆体系是研究其致病机理的必要条件.本研究将ToMV-N5株系的基因组克隆至含35S启动子瞬时表达载体pCB301中,农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)浸润接种本氏烟(Nicotiana benthamiana)和番茄结果表明,农杆菌侵染性克隆pCB301-ToMV-N5引起本氏烟和番茄系统性坏死症状,与其病毒粒子摩擦接种所引起的症状相一致.以绿色荧光蛋白基因(green fluorescent protein,GFP)代替ToMV-N5的外壳蛋白基因(coat protein,CP)获得表达载体pCB301-ToMV-N5CP45GFP,病毒接种结果表明,ToMV-N5能高效表达GFP,在病毒浸润接种浓度(OD600)为0.002时,GFP也能够有效表达.pCB301-ToMV-N5CP45GFP缺失了CP基因使得病毒不能系统性侵染,将烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)u5株系包含CP大小为647 nt(nt 5 498～6 145)片段克隆到pCB301-ToMV-N5CP45GFP中,获得pCB301-ToMV-N5CP45GFP-CPU5,浸润接种本氏烟结果表明,病毒能长距离移动,在寄主非接种部位表达GFP;浸润及摩擦接种番茄结果表明,只能在显微镜下观察到微弱GFP,且局限于接种部位.本研究成功获得了ToMV-N5株系的农杆菌侵染性克隆及其表达载体,为研究该病毒侵染的分子机理提供了基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	廖乾生	浙江理工大学生命科学学院生物工程研究所	15	33	4.0	5.0
2	程晓东	浙江理工大学生命科学学院生物工程研究所	4	11	2.0	3.0
3	卢冉	浙江理工大学生命科学学院生物工程研究所	5	10	2.0	3.0
4	刘妮娜	浙江理工大学生命科学学院生物工程研究所	1	7	1.0	1.0