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摘要:
[目的]构建普通烟草铁氧还蛋白Ⅰ(ferredoxin Ⅰ,Fdn-Ⅰ)原核表达载体,表达可溶性Fdn-Ⅰ蛋白,并制备其多克隆抗体,分析Fdn-Ⅰ在ToMV侵染烟草叶片内的表达情况.[方法]以Fdn-Ⅰ全长cDNA为模板,用PCR扩增Fdn-Ⅰ,克隆至原核表达载体pEGX-6p-1,构建Fdn-Ⅰ与GST融合表达载体pEGX-Fdn-Ⅰ,重组质粒转化原核表达菌株BL21,优化GST-Fdn-Ⅰ可溶性表达条件后大量表达蛋白,用GST亲和层析法纯化获得可溶性GST-Fdn-Ⅰ蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体.ELISA测定抗体效价,Western印迹法检测抗体的特异性和ToMV侵染前后烟草叶片内Fdn-Ⅰ的表达情况.[结果]在温度为28℃,IPTG诱导浓度为0.3 mmol·L-1条件下表达出大小为41.3 kD的可溶性融合蛋白.纯化获得约4 mg可溶性蛋白,免疫家兔制备了效价为1/6 400的多克隆抗体.Western印迹结果表明,该抗体可以与Fdn-Ⅰ的原核和酵母表达产物特异性结合.分析表明Fdn-Ⅰ在ToMV侵染后烟草叶片内含量明显低于其在健康烟草叶片内的含量.[结论]通过Fdn-Ⅰ大肠杆菌中的可溶性表达,制备获得了其高效价特异性多克隆抗体,利用该抗体检测表明ToMV侵染烟草降低了Fdn-Ⅰ的表达.
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文献信息
篇名 普通烟草铁氧还蛋白Ⅰ的原核表达、抗体制备及在ToMV侵染烟草体内表达分析
来源期刊 中国农业科学 学科 农学
关键词 铁氧还蛋白Ⅰ 原核表达 抗体 番茄花叶病毒
年,卷(期) 2010,(19) 所属期刊栏目
研究方向 页码范围 3981-3987
页数 分类号 S5
字数 语种 中文
DOI 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.19.010
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 李勇 中国科学院微生物研究所 225 3185 28.0 48.0
2 周常勇 西南大学植物保护学院 67 764 16.0 23.0
4 孙现超 西南大学植物保护学院 55 220 9.0 11.0
6 青玲 西南大学植物保护学院 47 293 9.0 12.0
传播情况
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研究主题发展历程
节点文献
铁氧还蛋白Ⅰ
原核表达
抗体
番茄花叶病毒
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国农业科学
半月刊
0578-1752
11-1328/S
大16开
北京中关村南大街12号
2-138
1960
chi
出版文献量(篇)
9193
总下载数(次)
12
总被引数(次)
254208
相关基金
中国博士后科学基金
英文译名:China Postdoctoral Science Foundation
官方网址:http://www.chinapostdoctor.org.cn/index.asp
项目类型:
学科类型:
国家自然科学基金
英文译名:the National Natural Science Foundation of China
官方网址:http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:数理科学
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