绿脓杆菌SYBR Green I实时定量PCR 检测方法的建立及初步应用

• 作者: 付彤 宋月 梁秀丽 王亚宾 程琨 韩立强 魏战勇
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 绿脓杆菌 16S rDNA 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 页码范围: 59-63
• 页数: 5页
• 分类号: S855.1
• 字数: 3030字
• 语种: 中文

摘要

为了建立绿脓杆菌的SYBR Green I实时定量PCR检测方法，以便更加快捷、方便的检测绿脓杆菌，根据16S rDNA高度保守的特性，在绿脓杆菌16S rDNA保守区设计1对引物，利用普通PCR技术扩增出绿脓杆菌16S rD-NA保守区277 bp的片段，并克隆到pMD-18 T载体上，纯化的质粒作为模板进行SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线，建立了绿脓杆菌的荧光定量PCR检测方法。并对方法的灵敏性、特异性、重复性进行评价，又进一步在临床实践中进行检验。结果显示，所建立的方法对标准样品的最小检出浓度为28拷贝/μL。并且特异性检验结果显示与常见的菌群没有交叉反应，重复性良好。在临床中检测疑似绿脓杆菌感染病料55份，用所建立的荧光定量方法检测出阳性病料40份，而普通的PCR方法检测出阳性病料32份。表明建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点，可以在临床中用于绿脓杆菌的检测。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王亚宾	河南农业大学牧医工程学院	92	621	14.0	21.0
2	梁秀丽		30	90	5.0	8.0
3	韩立强	河南农业大学牧医工程学院	114	497	11.0	15.0
4	付彤	河南农业大学牧医工程学院	47	219	9.0	13.0
5	魏战勇		18	131	6.0	11.0
6	宋月		2	17	2.0	2.0
10	程琨		1	5	1.0	1.0