幽门螺旋杆菌重组尿素酶B亚基的纯化及其免疫学性质的研究

• 作者: 刘昆梅 廖国玲 徐广贤 李秀萍 杨华 秦玉红 郭乐
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 幽门螺旋杆菌 尿素酶 尿素酶B亚基
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 23-29
• 分类号: Q819
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20141204

摘要

目的:幽门螺旋杆菌(Hp)尿素酶是Hp重要的定制因子和致病因子,Hp尿素酶活性位点位于Hp尿素酶B亚基(UreB),研发基于UreB的Hp疫苗是一种很有前景的防治Hp感染的策略.方法:主要利用基因克隆技术从幽门螺旋杆菌标准菌株SS1(Hp SS1)获得Hp尿素酶B亚基基因,并构建合有重组Hp尿素酶B亚基(rUreB)基因的重组表达载体pET-rUreB及其重组菌株;重组菌株经蛋白表达和优化后,利用Ni-NTP镍离子亲和层析和DEAE Sepharose FF阴离子交换层析纯化重组尿素酶B亚基(rUreB),并进一步通过腹腔注射免疫BALB/c小鼠,研究rUreB的免疫学性质.结果:通过基因克隆技术成功获得了Hp尿素酶B亚基基因,并成功构建了重组表达载体pET-rUreB及其重组菌株BL21(DE3)/pET-rUreB,经蛋白表达优化及纯化,可获得高纯度(96.5％)的重组蛋白rUreB.重组蛋白rUreB辅以弗氏佐剂腹腔注射免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA鉴定小鼠能够产生针对天然Hp尿素酶和UreB的高滴度特异性抗体,且能够显著性抑制Hp尿素酶的活性.结论:重组Hp尿素酶B亚基能够在大肠杆菌表达系统中获得较高水平的表达,具有较高的免疫学特异性,其抗体能够有效抑制Hp尿素酶活性.为研究基于尿素酶的防治Hp感染的Hp疫苗奠定了一定的实验基础.