基于磁珠富集法的绣线菊 SSR 分子标记分离与筛选

• 作者: Gulzar Khan 付鹏程 张发起 张金华 陈世龙 雷淑云
• 来源期刊: 生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 绣线菊 微卫星 磁珠富集 遗传多样性
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 79-83,87
• 页数: 6页
• 分类号: Q346+.5
• 字数: 4198字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1736.2014.03.001

摘要

微卫星序列（ SSR）具有多态性高、共显性遗传等特点，是一种极具价值的分子遗传标记。采用磁珠富集法从高山绣线菊基因组DNA中分离和筛选SSR标记。高山绣线菊基因组经限制性内切酶Mse I酶切后与接头连接，并与生物素标记SSR探针（ AC）15和（ AG）15杂交，然后通过链霉亲和素磁珠富集、洗脱、PCR扩增、克隆，完成微卫星文库构建。利用载体通用引物和探针序列引物进行PCR扩增，筛选重组克隆并测序，获得112条序列。随机挑选其中60条序列设计的引物，经初期筛选获得多态性引物16对。用所得16对引物对4个居群92个个体的蒙古绣线菊和高山绣线菊进行PCR扩增。统计分析PCR产物的毛细管电泳结果，发现4个居群的平均等位基因数、平均期望杂合度及平均观测杂合度都比较高。64个数据系列（4个居群×16个位点）中的26个显著偏离Hardy-Weinberg平衡，推测可能由于无效等位基因的存在所引起。分析显示研究开发的16对多态性SSR引物可以用于后续遗传多样性、物种进化与亲缘关系等方面研究，丰富了绣线菊遗传多样性研究的分子标记。