Limk1不同突变体HA融合表达载体构建及在细胞内定位

• 作者: 何敏毅 刘亚伟 李翠 漆松涛 赵亮 陈剑荣
• 来源期刊: 贵阳医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: LIM激酶1 载体构建 基因表达 融合蛋白 细胞内定位 突变体
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 475-478
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2683字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建LIM激酶(Limk)1不同突变体的HA融合表达载体,并在真核细胞中表达,观察这些突变体在细胞内定位.方法:利用聚合酶链式反应(PCR)扩增Limk1全长序列,构建HA-Limk1真核表达质粒;利用定点突变策略对HA-Limk1进行核定位信号(NLS)缺失突变,命名为Limk1-NLS(del);用合成两条互补序列退火获得目标片段插入载体的策略构建Limk1-NLS;将2表达质粒转染HepG2细胞,细胞免疫荧光方法以及核质分离后用western-blot检测其在细胞中定位.结果:经测序鉴定Limk1及其不同突变体序列正确,在HepG2细胞中高表达;其中HA-Limk1在细胞质、细胞核均有表达,Limk1-NLS (del)主要定位于细胞质,Limk1-NLS主要定位于细胞核.结论:成功构建了Limk1全长及不同突变体的HA融合表达载体,初步明确突变体在细胞内的定位.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘亚伟	南方医科大学南方医院神经外科	44	244	9.0	13.0
2	漆松涛	南方医科大学南方医院神经外科	397	2452	23.0	28.0
3	赵亮	南方医科大学基础医学院重大疾病的转录组及蛋白质组学教育部重点实验室	73	338	11.0	14.0
4	何敏毅	南方医科大学珠江医院器官移植科	11	54	4.0	7.0
5	陈剑荣	南方医科大学珠江医院器官移植科	13	26	4.0	4.0
6	李翠	南方医科大学基础医学院重大疾病的转录组及蛋白质组学教育部重点实验室	2	2	1.0	1.0