GATA1不同激酶活性突变体质粒的构建及蛋白表达和亚细胞定位

• 作者: 刘云鹏 李丹妮
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: GATA1 PAK5 磷酸化 基因克隆 融合蛋白 转染
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 22-26
• 页数: 5页
• 分类号: R730.23|Q782
• 字数: 3358字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12007/j.issn.02584646.2018.01.006

摘要

目的 采用大引物法构建GATA1不同激酶活性突变体GATA1 S161A S187A(死型)和GATA1 S161D S187D(激活型)真核表达载体,并证实其融合蛋白在细胞内的表达及定位,旨在进一步探讨其生物学功能和潜在肿瘤治疗靶点.方法 以GFP-GATA1WT为模板,采用大引物法扩增S161A S187A、S161D S187D突变体片段,双酶切克隆至pEGFP-C1表达载体中,将重组质粒转染至HEK293中,经免疫印迹鉴定融合蛋白的表达.结果 用大引物PCR法成功构建GATA1不同激酶活性突变体的真核表达载体pEGFP-GATA1 S161A S187A和pEGFP-GATA1 S161D S187D,验证了其融合蛋白表达.共聚焦激光显微镜技术显示,融合蛋白主要定位于细胞核内.结论 利用大引物法成功构建GATA1不同激酶活性突变体真核表达载体,并为进一步进行该突变体的结构和功能研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘云鹏	中国医科大学附属第一医院肿瘤内科	299	1742	18.0	25.0
2	李丹妮	中国医科大学附属第一医院肿瘤内科	15	10	2.0	3.0