TGM1基因RNA干扰表达载体pLVX-siTGM1的构建与鉴定

• 作者: 丘文苑 周欣 唐志平 张三泉 张芳 田歆 赵恬 陈荃 高歆婧
• 来源期刊: 皮肤性病诊疗学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: pLVX-shRNA1系统 RNA干扰 TGM1基因 HaCaT细胞
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 291-296
• 页数: 6页
• 分类号: Q782
• 字数: 4383字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8468.2014.04.008

摘要

目的:构建针对转谷氨酰胺酶1基因(transglutaminase 1,TGM1)的shRNA表达载体,通过脂质体进行HaCaT细胞内转染,筛选出最显著抑制TGM1的shRNA干扰载体.方法:构建三个针对TGM1基因的RNA干扰质粒:pLVX-543 shRNAi、pLVX-1265shRNAi和pLVX-1649shRNAi.通过双酶切、PCR鉴定及基因片段测序分析验证构建效果.脂质体介导质粒转染HaCaT细胞.实时定量RT-PCR检测TGM1 mRNA的表达,Western blot检测TGM1蛋白的表达.结果:重组构建的三个干扰载体经PCR分析及插入基因片段序列分析,三对碱基成功插入到预计位点,序列完全一致.转染三个重组干扰表达载体72小时后,RT-PCR检测TGM1基因沉默的效率,pLVX-543 shRNAi、pLVX-1265shRNAi和pLVX-1649shRNAi分别为62.4％、73.5％和91.3％;Western blot检测TGM1蛋白的表达水平均明显降低,其中pLVX-1649shRNAi干扰载体降低最明显.结论:成功构建了TGM1 shRNA重组慢病毒载体,并且筛选出最有效抑制TGM1表达的干扰载体pLVX-1649shRNA,为进一步研究TGM1基因在鱼鳞病发病中的功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田歆		59	122	6.0	9.0
2	周欣		44	140	6.0	9.0
3	张三泉		31	100	5.0	8.0
4	高歆婧		5	15	2.0	3.0
5	丘文苑		6	6	2.0	2.0
6	陈荃		7	9	2.0	3.0
7	唐志平		6	26	2.0	5.0
8	赵恬		7	33	4.0	5.0
9	张芳		9	27	3.0	5.0