环介导等温扩增联合横向流动试纸条可视化检测海豚链球菌方法的建立

• 作者: 周前进 王瑞娜 陈炯
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 海豚链球菌 环介导等温扩增技术(LAMP) 横向流动试纸条(LFD) 特异性 灵敏度
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 1584-1594
• 页数: 11页
• 字数: 7638字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2014.12.014

摘要

海豚链球菌(Streptococcus iniae)是一种革兰氏阳性球菌，呈β溶血，可感染多种淡水和海洋鱼类。本研究利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)进行核酸扩增，通过横向流动试纸条方法(lateral flow dipstick, LFD)实现检测，建立了一种可应用于海豚链球菌快速检测的LAMP-LFD技术。该技术以海豚链球菌促旋酶B亚单位(gyrase subunit B, gyrB)基因为检测靶标，设计3对引物进行由生物素标记的LAMP扩增反应，产物经异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)标记的探针杂交后，在LFD上完成检测。经优化的核酸扩增最适条件为65℃反应30 min，在此条件下，阳性扩增起始时间与模板浓度之间呈典型的线性相关性。从核酸扩增反应开始到LFD显色，整个检测时程只需40 min左右，比常规PCR技术缩短约2 h。LAMP-LFD能特异性地检出海豚链球菌，针对病原纯培养物的检测灵敏度为8.70×101 cfu/mL，是LAMP检测的10倍、常规PCR检测的100倍。以灵敏度浓度(8.70×101 cfu/mL)的海豚链球菌基因组DNA为模板进行的LAMP-LFD结果显示该方法具有良好的重复性。针对人工污染花鲈(Lateolabrax japonicus)肝组织的检测灵敏度为4.35×103 cfu/mL，同样为常规PCR检测方法的100倍。利用本方法可成功从患病花鲈的组织样品中检测出海豚链球菌，检测结果与常规的细菌分离鉴定方法结果一致。因此，利用LAMP-LFD能特异、准确、高效地检测出海豚链球菌，而且操作简单、费用低、耗时短，有望成为海豚链球菌的常规检测方法。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈炯	宁波大学生物与海洋科学系	100	594	13.0	18.0
2	周前进	宁波大学生物与海洋科学系	14	95	6.0	9.0
3	王瑞娜	宁波大学生物与海洋科学系	4	57	4.0	4.0