结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-TB7.7的融合表达及其在小鼠上的细胞免疫学特性

• 作者: 万婷 单法 孟闯 徐正中 殷月兰 焦新安 解晓莉 陈祥
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 结核分枝杆菌 CFP10-ESAT6-TB7.7融合蛋白 原核表达 细胞免疫
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 130-134,174
• 页数: 6页
• 分类号: Q378
• 字数: 2829字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2014.02.005

摘要

目的 构建结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-TB7.7融合蛋白的表达质粒,利用大肠杆菌表达系统获得原核蛋白,在小鼠模型上评价其细胞免疫学特性.方法 通过PCR扩增出lhp-linker-esat6-linker和linker-Rv2654c片段,构建正确的pET32a(+)-lhp-linker-esat6-linker-Rv2654c原核表达质粒,转化BL21(DE3)后在IPTG诱导下表达,并纯化该融合蛋白,western blot验证蛋白的免疫原性,通过T细胞增殖实验和夹心ELISA评价其细胞免疫学特性.结果 成功构建pET32a(+)-lhp-linker-esat6-linker-Rv2654c原核表达质粒,SDS-PAGE显示在45 kDa处出现目的 条带,Western blot证明融合蛋白对anti-ESAT6,anti-CFP10,anti-His单抗和rGST-TB7.7多抗血清均有反应,说明该融合蛋白具有良好的免疫反应性,T淋巴细胞增殖实验显示该蛋白能明显引起小鼠的T细胞免疫反应.夹心ELISA实验也表明,融合蛋白刺激产生的IFN-γ和IL-4水平与对照组相比均有显著性差异,同时融合蛋白诱导产生的IFN-γ水平明显高于IL-4.结论 CFP10-ESAT6-TB7.7融合蛋白在大肠杆菌系统中实现可溶性表达,并获得免疫反应性良好的纯化产物,该融合蛋白能引起明显的T细胞增殖,具有诱导Th1型免疫应答的特性.