结核分枝杆菌ESAT6-CFP10蛋白的融合表达及其细胞免疫学特性

• 作者: 万婷 单法 孟闯 徐正中 焦新安 申峻松 范峰 解晓莉 陈祥
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 结核分枝杆菌 ESAT6 CFP10 细胞免疫 牛结核病 刺激原
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 789-794
• 页数: 6页
• 分类号: S852.618
• 字数: 4450字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.05.016

摘要

本研究旨在原核表达结核分枝杆菌ESAT6 CFP10融合蛋白,分析其在小鼠模型中的细胞免疫应答特性,并评价其作为牛结核外周血IFN-γ释放试验特异性刺激原的能力.首先,通过构建pET30a(+)-esat6-linker-lhp重组质粒,BL21(DE3)中诱导表达ESAT6-CFP10融合蛋白并纯化,随后经细胞表面分子的FACS分析、ELISPOT试验等分析其在小鼠中的细胞免疫应答特性,同时作为刺激原用于奶牛IFN γ释放试验,评价其用于牛结核病诊断的潜能.结果表明:SDS-PAGE显示目的蛋白成功表达,Western blotting证实其对ESAT6、CFP10单克隆抗体有良好免疫反应性.FACS结果显示其上调树突状细胞表面CD80和CD86分子以及小鼠脾CD4+和CD8+T细胞表面CD69的表达,ELISPOT结果表明其诱导的特异性IFN-γ分泌细胞数显著高于IL 4分泌细胞数,显示其诱导产生Th1型免疫应答的能力.在479份奶牛外周血样本的r-干扰素释放试验中,ESAT6-CFP10蛋白与PPD作为刺激原的阳性符合率为70.0％,阴性符合率为95.2％.本研究成功表达ESAT6-CFP10融合蛋白,其具备诱导Th1型免疫应答特性,在牛结核外周血γ-干扰素释放试验中可作为候选刺激抗原.