猪源札幌病毒衣壳蛋白的原核表达及免疫原性检测

• 作者: 兰喜 刘伟 单兴娜 张韵 杨勃 杨彬 柳纪省 王恩丽 马小军
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 札幌病毒 衣壳蛋白 原核表达
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 页码范围: 1273-1278
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文

摘要

为获得猪源札幌病毒(SaV)衣壳蛋白(VP1),以SaV CH430株的RNA为模板,采用RT-PCR扩增VP1基因;将其克隆到原核表达载体pET-30a中,并将成功构建的原核表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达.结果显示,获得的VP1基因全长为1 635 bp,编码545个氨基酸.SDS-PAGE结果显示,目的条带大小为63 ku,与预期结果相符.重组菌在37℃、IPTG终浓度为0.8 mmol/L、诱导表达6h时重组蛋白的表达量达到最大值,表达的目的蛋白主要以包涵体的形式存在.将纯化的VP1重组蛋白免疫家兔,得到了超免疫血清.Western-blot分析表明,该重组蛋白与超免疫血清具有良好的反应原性.上述试验结果为深入研究VP1蛋白的功能和研制ELISA诊断试剂盒奠定了基础.