通用型猪流感病毒PCR-DHPLC检测方法的建立

• 作者: 张子宏 徐超 杨娜 韩雪清
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流感病毒 M基因 RT-PCR 变性高效液相色谱
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 页码范围: 1292-1296
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.5
• 语种: 中文

摘要

应用PCR技术结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,建立通用型猪流感病毒的快速筛检方法.查找、分析猪流感病毒M基因的保守区,设计了1对特异性引物.RT-PCR扩增后经变性高效液相色谱技术分析研究方法的特异性、敏感性和应用性.DHPLC法能特异性检出H1N1、H5N1和H3N2亚型猪流感病毒,与猪瘟病毒、口蹄疫病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型无交叉反应.对构建的含有M基因的重组质粒,该方法的检出下限为100 copies核酸.对210份存档猪流感鼻拭子样品,DHPLC法与商业化定量PCR的检测结果完全一致.DHPLC技术为临床大批量猪流感样品的监测提供了一种新的、自动化、高通量的核酸分析平台.