吉富罗非鱼源无乳链球菌Sip-GAPDH融合基因的构建及其原核表达

• 作者: 吴灶和 李桂欢 汤菊芬 王蓓 简纪常 鲁义善 黄郁葱
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 无乳链球菌 Sip-GAPDH融合基因 重叠延伸PCR技术 原核表达
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 页码范围: 137-142
• 页数: 6页
• 语种: 中文

摘要

利用重叠延伸（SOEing）PCR技术，将吉富罗非鱼（Oreochromis niloticus）源无乳链球菌（Streptococcus agalactiae） ZQ0910株表面免疫原性蛋白（Surface immunogenic protein，Sip）基因与甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）基因通过Linker序列融合，构建成为Sip-GAPDH融合基因。将其定向克隆至原核表达载体pET-32a（+）中，在大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达。结果表明，重组质粒pET-32a-Sip-GAPDH在大肠杆菌BL21（DE3）中表达后所获得的融合蛋白Sip-GAPDH分子量为102.01 kD，表达最佳条件为37℃，IPTG浓度0.1 mmol/L，诱导5 h。Western blot鉴定结果表明融合基因得到了成功表达。