针对ALK4基因的TALEN质粒构建与活性鉴定

• 作者: 周红 曾凡才 王轲 顾洪
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 类激活素激酶受体4 类转录激活因子效应物核酸酶 基因敲除 HEK293T细胞 质粒构建
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 210-216
• 语种: 中文

摘要

旨在利用类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)技术构建具有活性的敲除类激活素激酶受体4(Activin receptor-like kinase 4,ALK4)的TALEN质粒.利用TALEN在线设计工具,根据TALEN设计原则和ALK4剪接异构体的共同序列确定基因敲除的靶位点、TALEN识别序列和用于活性验证的限制性酶切位点.利用质粒文库试剂盒快速构建TALEN质粒,并通过酶切、测序和BLAST比对加以验证.应用脂质体转染法将构建质粒导入HEK293T细胞,通过共转染的pEGFP-N1质粒判断转染效率.利用嘌呤霉素进行阳性筛选后提取基因组DNA,PCR扩增靶序列,HhaⅠ酶切纯化后的PCR产物.结果显示,来自转染TALEN质粒细胞基因组的PCR产物的酶切效率明显下降,提示部分细胞的ALK4基因发生了突变.首次成功构建了在HEK293T细胞中有活性的TALEN质粒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾凡才	电子科技大学生命科学与技术学院	26	70	5.0	6.0
3	周红	电子科技大学生命科学与技术学院	5	35	3.0	5.0
6	顾洪	泸州医学院生物化学与分子生物学实验室	1	3	1.0	1.0
7	王轲	泸州医学院生物化学与分子生物学实验室	1	3	1.0	1.0