破骨细胞抑制凝集素相关蛋白2的真核表达及多克隆抗体制备

• 作者: 刘广超 吴素霞 柴立辉 王战争 田文志 马远方
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: C型凝集素相关蛋白 真核表达 多克隆抗体 树突状细胞
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 1374-1377,1392
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3884字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2014.10.016

摘要

目的：为了获得真核表达的重组蛋白OCILRP2-Fc和OCILRP2特异性抗体，用于OCILRP2生物学功能的进一步研究。方法：构建了融合人IgG Fc段的小鼠OCILRP2真核表达载体pIg-CD5-OCILRP2，将pIg-CD5-OCILRP2转染CHO细胞，G418筛选稳定表达细胞株；Protein A 亲和层析从 CHO 细胞培养上清中纯化重组蛋白OCILRP2-Fc 并免疫家兔制备OCILRP2多克隆抗体。 ELISA检测抗血清和多克隆抗体的效价，Western blot 验证多克隆抗体的特异性，并应用该抗体检测OCILRP2在树突状细胞（ Dendritic cells ，DC）中的表达。结果：ELISA结果表明OCILRP2-Fc稳定表达细胞株经过多次传代培养后仍然具有较高的蛋白表达水平；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示纯化后的蛋白只有单一条带出现，且该条带可以被抗人IgG检测到；重组蛋白OCILRP2-Fc免疫家兔获得的抗血清和纯化后得到的OCILRP2多克隆抗体效价分别为1∶1280000和1∶320000，Western blot证明该抗体可以和免疫原OCILRP2-Fc及NIH/3T3细胞中表达的OCILRP2特异性结合。应用该抗体检测OCILRP2在 DC 的表达发现 OCILRP2在成熟 DC 的表达明显高于不成熟 DC。结论：获得了真核表达的重组蛋白OCILRP2-Fc和高效价的OCILRP2特异性抗体，为进一步研究OCILRP2在免疫应答中的功能奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴素霞	抗体药物河南省工程实验室河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室	1	0	0.0	0.0
2	柴立辉	抗体药物河南省工程实验室河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室	1	0	0.0	0.0
3	王战争	抗体药物河南省工程实验室河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室	1	0	0.0	0.0
4	刘广超	抗体药物河南省工程实验室河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室	1	0	0.0	0.0
5	田文志	抗体药物河南省工程实验室河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室	1	0	0.0	0.0